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前言

在過(guò)去的十幾年中，T細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)和抑制檢查點(diǎn)的單克隆抗體的開發(fā)極大地改變了免疫治療的結(jié)果。然而，PD－1的治療仍然只有10－30％的患者表現(xiàn)出長(zhǎng)期，持久的反應(yīng)，大多數(shù)人群缺乏響應(yīng)，還有獲得性耐藥以及免疫相關(guān)不良事件（IRAE）也是巨大的障礙。克服PD－1治療局限性的機(jī)制之一是針對(duì)與腫瘤微環(huán)境相關(guān)的其他免疫檢查點(diǎn)。

目前，TIGIT被認(rèn)為是最有前景和潛力的靶點(diǎn)之一，多種證據(jù)支持TIGIT在限制腫瘤的適應(yīng)性免疫和固有免疫方面起著關(guān)鍵作用。近日，百濟(jì)和君實(shí)的交易又使TIGIT再一次成為熱點(diǎn)。下面，小編就帶大家來(lái)一起回顧一下TIGIT在腫瘤免疫學(xué)中的作用以及目前基于TIGIT的腫瘤免疫治療的研究進(jìn)展。

TIGIT功能軸與配體

TIGIT（也稱為WUCAM、Vstm3、VSIG9）是Ig超家族的一種受體，在限制適應(yīng)性和固有免疫方面起著關(guān)鍵作用。TIGIT參與了一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，涉及多個(gè)IRs（例如，CD96／TACTILE，CD112R／PVRIG）、一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)性共刺激受體（DNAM－1／CD226）和多個(gè)配體（例如，CD155，CD112）。因此，與CD28／CTLA－4／CD80／CD86通路有一些相似之處，抑制性受體和共刺激受體競(jìng)爭(zhēng)性地與同一配體結(jié)合。

TIGIT由活化的CD8＋T和CD4＋T細(xì)胞、自然殺傷（NK）細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）和濾泡輔助性T細(xì)胞表達(dá)。與DNAM－1／CD226形成鮮明對(duì)比，TIGIT在原始T細(xì)胞弱表達(dá)。在癌癥中，TIGIT與PD－1在小鼠和人類腫瘤抗原特異性CD8＋T細(xì)胞和CD8＋腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）上共表達(dá)。它還與其他IRs共表達(dá)，如在腫瘤中耗竭的CD8＋T細(xì)胞上的TIM－3和LAG－3。此外，TIGIT在健康人和癌癥患者的外周血單核細(xì)胞中高表達(dá)，并在TME中進(jìn)一步上調(diào)。

TIGIT結(jié)合兩個(gè)配體，CD155和CD112，在單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（DC）和許多非造血細(xì)胞（包括不同組織學(xué)類型的腫瘤細(xì)胞）上表達(dá)。TIGIT結(jié)合CD155的親和力高于競(jìng)爭(zhēng)受體CD226和CD96。

TIGIT與CD112弱結(jié)合，CD112R結(jié)合CD112的親和力高于CD226。有趣的是，CD155的表達(dá)在活性氧依賴的DNA損傷反應(yīng)激活時(shí)增加，該反應(yīng)調(diào)節(jié)NK細(xì)胞與T細(xì)胞和骨髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）的相互作用。此外，F(xiàn)ap2蛋白來(lái)自核梭桿菌（Fusobacterium nucleatum）是一種與結(jié)直腸癌相關(guān)的厭氧革蘭氏共生菌，可直接與TIGIT結(jié)合，但不能與CD226結(jié)合，從而抑制NK細(xì)胞和T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤反應(yīng)。這些發(fā)現(xiàn)表明，腸道微生物組以TIGIT介導(dǎo)的方式調(diào)節(jié)固有免疫反應(yīng)。

TIGIT結(jié)構(gòu)與信號(hào)通路

TIGIT由一個(gè)細(xì)胞外免疫球蛋白（Ig）可變結(jié)構(gòu)域、1型跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域組成，胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域其具有兩個(gè)在小鼠和人類中保守的抑制基序：免疫受體基于酪氨酸的抑制基序（ITIM）和Ig尾酪氨酸樣（ITT）基序。結(jié)合到CD155的TIGIT晶體結(jié)構(gòu)顯示兩個(gè)TIGIT／CD155二聚體形成一個(gè)以TIGIT／TIGIT順式同源二聚體為核心的異四聚體，每個(gè)TIGIT分子與一個(gè)CD155分子結(jié)合。這種順?lè)词绞荏w聚集介導(dǎo)細(xì)胞粘附和信號(hào)傳遞。

在小鼠中，ITIM（Y227）或ITT樣基序殘基（Y233）的磷酸化可觸發(fā)TIGIT抑制信號(hào)。然而，在人NK細(xì)胞系YTS中，TIGIT／CD155結(jié)合通過(guò)一個(gè)ITT樣基序啟動(dòng)主要的抑制信號(hào)，而ITIM基序介導(dǎo)一個(gè)較小的抑制信號(hào)。在TIGIT／CD155結(jié)合激活后，ITT樣基序在Tyr225處磷酸化，并與胞漿內(nèi)信號(hào)分子Grb2和β－arrestin 2結(jié)合以招募含有肌醇的SH2磷酸酶－1（SHIP－1）。SHIP－1阻礙磷酸肌醇3激酶和絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)傳導(dǎo)。SHIP－1還抑制TRAF6和NF－κB的激活，導(dǎo)致NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN－γ減少。

TIGIT的作用機(jī)制

TIGIT通過(guò)多種機(jī)制潛在地抑制固有和適應(yīng)性免疫。首先，在小鼠模型中，TIGIT通過(guò)與DCs上的CD155結(jié)合間接地阻礙T細(xì)胞的功能。TIGIT與DCs的結(jié)合誘導(dǎo)CD155磷酸化并觸發(fā)一個(gè)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)形成免疫耐受性DCs，降低IL－12的產(chǎn)生并導(dǎo)致IL－10的增加。

第二，TIGIT直接表現(xiàn)出免疫細(xì)胞的內(nèi)在抑制作用。在小鼠和人類中，TIGIT抑制NK細(xì)胞脫顆粒、細(xì)胞因子生成和NK細(xì)胞介導(dǎo)的CD155＋腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性。TIGIT＋NK細(xì)胞與表達(dá)CD155的MDSCs相互作用降低了ZAP70／Syk和ERK1／2的磷酸化，降低了NK細(xì)胞的細(xì)胞溶解能力。

第三，多項(xiàng)證據(jù)表明TIGIT阻礙CD155介導(dǎo)的CD226活化。CD226是一種共刺激受體，廣泛表達(dá)于免疫細(xì)胞，包括T細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞等，以及血小板。TIGIT以比CD226更高的親和力結(jié)合CD155，從而限制CD226介導(dǎo)的激活。另外，TIGIT還直接在細(xì)胞上順式結(jié)合CD226，破壞其與CD155的同源二聚體的結(jié)合能力。

第四，TIGIT／CD226表達(dá)的平衡調(diào)節(jié)T細(xì)胞和NK細(xì)胞的效應(yīng)功能。在TCR激活的CD4＋T細(xì)胞中，用shRNA敲除TIGIT的表達(dá)增加了T－bet的表達(dá)和IFN－γ的產(chǎn)生；相反，CD226基因敲除可降低T－bet表達(dá)和IFN－γ的產(chǎn)生�？梢酝ㄟ^(guò)平衡CD8＋T細(xì)胞中的CD226和TIGIT來(lái)增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤排斥反應(yīng)。

第五，TIGIT作用于Tregs，增強(qiáng)免疫抑制功能和穩(wěn)定性。與TIGIT?Tregs相比，TIGIT＋Tregs在外周和腫瘤部位上調(diào)了許多Treg基因標(biāo)志物，包括Foxp3、Helios、neuronilin－1、CTLA－4、PD－1和LAG－3。TIGIT＋Tregs還抑制Th1和Th17的促炎性反應(yīng)，但不抑制Th2。TIGIT激活后，TIGIT＋＋Tregs產(chǎn)生IL－10和纖維蛋白原樣蛋白2，介導(dǎo)T細(xì)胞抑制。

TIGIT靶向藥物的臨床進(jìn)展

目前，靶向TIGIT－PVR途徑變得越來(lái)越重要，一些生物技術(shù)／制藥公司正在致力于開發(fā)抗TIGIT的抗體或雙抗。截至2021年底，共有23種針對(duì)TIGIT的單抗或雙抗正在商業(yè)化開發(fā)，并處于不同的臨床開發(fā)階段。

放眼全球，開發(fā)者不乏羅氏、百時(shí)美施貴寶、默沙東等頭部大藥企的身影。其中，進(jìn)度最快的當(dāng)屬羅氏、默沙東，均處于臨床Ⅲ期。

國(guó)內(nèi)藥企在TIGIT進(jìn)度也并不落后，百濟(jì)神州、信達(dá)生物、君實(shí)生物、百奧泰、復(fù)宏漢霖、康方生物等紛紛入局。其中，百濟(jì)神州的研發(fā)進(jìn)度最快，已經(jīng)進(jìn)入到臨床Ⅲ期，與羅氏、默沙東的進(jìn)度持平。

2021年12月20日，百濟(jì)神州與諾華達(dá)成合作協(xié)議，諾華將獲得百濟(jì)神州TIGIT抗體的美國(guó)、加拿大、歐洲多國(guó)及日本的權(quán)益。為此，諾華將支付3億美元預(yù)付款，6億美元或7億美元的額外付款，18．95億美元里程碑金額以及20－25％的銷售分成。

實(shí)際上，2021年以來(lái)，海外大藥企圍繞TIGIT的重磅交易層出不窮。5月19日，百時(shí)美施貴寶宣布以2億首付、13．6億潛在里程金收購(gòu)Agenus還在臨床前的TIGIT雙抗AGEN1777；6月14日，葛蘭素史克與iTeosTherapeutics達(dá)成合作協(xié)議，引進(jìn)后者研發(fā)的TIGIT單抗EOS－448，葛蘭素史克支付6．25億美元預(yù)付款＋14．5億美元里程碑金額。顯然，TIGIT單抗的軍備競(jìng)賽已經(jīng)逐漸白熱化。

開發(fā)過(guò)程中的考量因素

一些因素，如抗體骨架的來(lái)源（小鼠、嵌合、人源化或全人類）、抗體的IgG骨架、FcγR結(jié)合狀態(tài)和劑量，在抗體的開發(fā)和最終臨床成功中起著關(guān)鍵作用。

來(lái)源

用于治療應(yīng)用的抗體的來(lái)源可以顯著影響分子的臨床成功。到目前為止，所有經(jīng)批準(zhǔn)的免疫檢查點(diǎn)阻斷劑要么是人源化的，要么是全人源的，臨床開發(fā)中的大多數(shù)抗TIGIT抗體都是完全人源抗體。

FcγR結(jié)合狀態(tài)

幾乎所有商業(yè)開發(fā)的免疫檢查點(diǎn)阻斷抗體都有IgG骨架。已知基于IgG的抗體通過(guò)其Fc區(qū)域與先天效應(yīng)免疫細(xì)胞上的FcγR相互作用，并在靶細(xì)胞中誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC）。ADCC是治療性抗體研制過(guò)程中考慮的最常見因素，但其對(duì)免疫檢查點(diǎn)阻斷劑活性的作用尚不完全清楚。

在臨床發(fā)展中，抗TIGIT抗體的FcγR結(jié)合區(qū)在某些分子中是活躍的，而在其他分子中是失活的。根據(jù)公開信息， tiragolumab、ociperlimab、vibostolimab、EOS－448、etigilimab和AGEN－1307具有活性FcγR結(jié)合區(qū)，而domvanalimab和BMS－986207，具有非活性FcγR結(jié)合區(qū)�？贵w中FcγR結(jié)合區(qū)的存在或缺失是否會(huì)對(duì)抗TIGIT抗體的臨床療效產(chǎn)生影響仍有待觀察。

劑量

各種因素，包括親和力，藥效學(xué)因素和藥代動(dòng)力學(xué)因素都影響到最大耐受劑量和藥物預(yù)期產(chǎn)生最大效果的劑量。多個(gè)臨床項(xiàng)目的I期研究結(jié)果表明，抗TIGIT抗體具有良好的耐受性。

研究使用不同劑量范圍的抗體，每?jī)芍埽≦2W）或每三周（Q3W）給藥一次。在臨床開發(fā)過(guò)程中，任何抗TIGIT抗體的單藥治療或與抗PD－1抗體聯(lián)合治療均未記錄劑量限制性毒性，表明針對(duì)該靶點(diǎn)的分子具有廣泛的治療指數(shù)�？筎IGIT抗體單藥治療后觀察到的臨床活性很低，甚至為零，表明需要與抗PD－1／PD－L1或其他藥物聯(lián)合治療。

安全性

當(dāng)作為單一療法以及與PD－1／PD－L1阻滯劑聯(lián)合使用時(shí)，發(fā)現(xiàn)抗TIGIT抗體通常具有良好的耐受性。超過(guò)10％的患者報(bào)告的最常見不良事件包括疲勞和瘙癢，都是1級(jí)。在接受vibostolimab單藥治療的兩名患者中報(bào)告了兩個(gè)2級(jí)事件，即貧血和腹瀉�？筎IGIT抗體單一療法未報(bào)告3級(jí)或以上不良事件。

挑戰(zhàn)與展望

TIGIT是腫瘤免疫治療的一個(gè)很有前途的靶點(diǎn)，特別是與PD－1阻斷劑聯(lián)合應(yīng)用。然而，隨著基于TIGIT的癌癥患者臨床試驗(yàn)的進(jìn)展，我們需要解決許多關(guān)鍵問(wèn)題和挑戰(zhàn)。首先，TIGIT阻斷劑對(duì)癌癥患者的作用機(jī)制是什么？這些效應(yīng)主要是由其在CD8＋T細(xì)胞、Tregs或兩者中的直接活性介導(dǎo)的嗎？TIGIT能阻斷TME中APCs的重編程以增加T細(xì)胞的啟動(dòng)或激活嗎？這些影響是否會(huì)因疾病階段的不同而有所不同？TIGIT阻斷劑能否在體內(nèi)介導(dǎo)NK細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)MHCⅠ類缺陷腫瘤的反應(yīng)性，這是否為PD－1難治性癌癥患者提供臨床益處的機(jī)會(huì)？而且，除了PD－1／TIGIT雙重阻斷劑外，CD112R或CD96阻斷劑是否有任何潛在的協(xié)同效應(yīng)，如小鼠腫瘤模型和體外研究所示？在這方面，我們必須記住，CD96作為IR的作用仍然存在爭(zhēng)議。此外，CD112R阻斷可以潛在地增強(qiáng)自體人類腫瘤抗原特異性CD8＋T細(xì)胞的證據(jù)仍然缺失。

另外，CD226在PD－1／TIGIT雙重阻斷中起著重要的調(diào)節(jié)作用。TME中CD8＋T細(xì)胞和NK細(xì)胞的下調(diào)可能是PD－1／TIGIT雙重阻斷成功的主要障礙。因此，有必要設(shè)計(jì)新的策略來(lái)增加CD226的表達(dá)和信號(hào)傳遞，以防止其在TME中的下調(diào)。值得注意的是，一項(xiàng)正在進(jìn)行的臨床試驗(yàn)是在多種癌癥中測(cè)試抗CD226的激動(dòng)劑（NCT04099277）。然而，由于CD226在介導(dǎo)血小板粘附和活化中的作用，潛在的血液學(xué)不良事件需要仔細(xì)監(jiān)測(cè)。最后，使用不同工程化Fc抗TIGIT單抗的臨床試驗(yàn)可能有助于確定FcγR協(xié)同在TIGIT阻斷中的作用。

總之，TIGIT在發(fā)現(xiàn)后僅10年，就已經(jīng)作為免疫治療的靶點(diǎn)進(jìn)入臨床試驗(yàn)。隨著對(duì)TIGIT介導(dǎo)的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)研究的深入，將有助于針對(duì)癌癥患者進(jìn)行TIGIT阻斷劑的優(yōu)化組合策略設(shè)計(jì)，也將有助于開發(fā)靶向TIGIT療法來(lái)治療其他表達(dá)該蛋白的慢性疾病。

參考文獻(xiàn)：

1． TIGIT in cancer immunotherapy． J Immunother Cancer 2020；8：e000957．

2． Targeting TIGIT for Immunotherapy of Cancer： Update on Clinical Development． Biomedicines． 2021 Sep； 9（9）：1277．

3． 各公司官網(wǎng)