對關鍵模塊進行后續(xù)分析，以確定關鍵模塊與具有實質(zhì)性生物學意義的JDM病理狀態(tài)之間的相關性（圖6）�？梢詮膱D中發(fā)現(xiàn)三大模塊的相關性均在0．80以上，p值均小于0．05。

圖6． 三個關鍵模塊和JDM基因之間的散點圖

3． GO和KEGG富集分析

      對關鍵模塊中的所有基因進行GO和KEGG通路富集，挖掘與JDM相關的生物學功能。（圖7）

GO分析的生物學過程（BP）顯示（圖7A）：

藍色模塊中的基因與SRP依賴的共譯蛋白靶向膜的產(chǎn)生、共譯蛋白靶向膜、蛋白靶向ER、核轉(zhuǎn)錄mRNA分解過程和蛋白定位到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的建立有關；

淺綠色模塊中的基因與I型干擾素的響應、I型干擾素信號通路、細胞對I型干擾素的響應、對病毒的防御響應和對病毒的響應有關。

午夜藍模塊中的基因與細胞對化學刺激的反應、細胞外結構組織、細胞外基質(zhì)組織、對有機物的反應和細胞運動性有關。

CC（細胞成分）和MF（分子功能）在三個關鍵模塊中的路徑富集結果也可在圖中得出，在此不一一贅述（圖7B＆C）。

三個模塊中KEGG通路富集分析結果也在圖中可以看到（圖7D）。

圖7． GO分析結果和KEGG富集分析結果

4． 借助PPI網(wǎng)絡篩選關鍵基因和關鍵模塊

      篩選出關鍵模塊連接讀較高的45個DEG作為候選的樞紐基因，然后根據(jù)STRING數(shù)據(jù)庫構建PPI網(wǎng)絡，在構建PPI網(wǎng)絡的過程中，使用MCODE得分＞0的標準，選出了28個樞紐基因并構建了網(wǎng)絡（圖8）。（圖中不同的形狀代表了通過分子復合物檢測（MCODE）構建的不同簇，即橢圓代表簇1，三角形代表簇2；顏色由深褐色到淺褐色的變化表示MCODE得分由高到低的變化）

圖8． 45個樞紐基因的PPI網(wǎng)絡

接著使用另一個GEO數(shù)據(jù)庫（GSE11971）的JDM數(shù)據(jù)進行驗證。最后發(fā)現(xiàn)：

SP110、SAMHD1、IFIT5、PLSCR1、IFI16、MX2和CLIC1等7個基因在JDM中顯著上調(diào)；

COX5B、COX6A2、COX7C、NDUFA4、NDUFB4、MDH2、ATP5O、ATP5B、RPL21、TPI1、SLC25A3、VDAC1和EIF4B等13個基因在JDM中顯著下調(diào)。

此外這篇學習筆記還給出了樞紐基因在JDM發(fā)病過程中的機制圖（圖9）

圖9． 樞紐基因在JDM發(fā)病過程中的機制圖

5． 相關小分子藥物篩選

利用CMap數(shù)據(jù)庫（一個化學試劑作用表達譜數(shù)據(jù)庫，研究者可以通過自己做出的疾病表達譜或化學物質(zhì)刺激后的表達譜所獲得差異表達基因，通過在cMap中的查詢，可以獲得類似表達藥物或者相反表達藥物）進行小分子藥物篩選。篩選標準為p＜0．05，從而確定了12種小分子藥物（表1）：

阿卡西汀、頭孢糖苷、lanatoside C、去氧胺、法莫宗、他尼霉素和LY－294002可以減緩JDM的發(fā)展；

貝托尼、非洛地平、丙戊酸和西羅莫司可能為JDM提供潛在的治療目標。

表1． 篩選得到的12種小分子藥物

小結

這篇學習筆記利用GEO數(shù)據(jù)庫，使用WGCNA進行模塊分析，之后對得到的關鍵模塊的基因進行GO和KEGG富集分析，得到與關鍵模塊有關的生物學過程，細胞成分和分子功能；然后將篩選得到的差異表達基因進行PPI網(wǎng)絡分析得到樞紐基因，并通過另一個GEO數(shù)據(jù)集對樞紐基因進行篩選得到20個真正的樞紐基因；最后通過得到的基因篩選得到與JDM有關的小分子化合物，從而確定了治療靶點和治療抑制劑。