01 文章背景簡(jiǎn)介  

酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）是由于長(zhǎng)期大量飲酒導(dǎo)致的肝臟疾病。初期通常表現(xiàn)為脂肪肝，進(jìn)而可發(fā)展成酒精性肝炎、肝纖維化、肝硬化甚至肝癌。其主要臨床特征是惡心、嘔吐、黃疸、可有肝臟腫大和壓痛。并可并發(fā)肝功能衰竭和上消化道出血等。嚴(yán)重酗酒時(shí)可誘發(fā)廣泛肝細(xì)胞壞死，甚至肝功能衰竭。酒精性肝病是我國(guó)常見(jiàn)的肝臟疾病之一，是肝硬化和肝臟相關(guān)死亡的主要因素，嚴(yán)重危害人民健康。

目前，還沒(méi)有太好的治療方法可以阻止酗酒者酒精性病變向肝硬化發(fā)展，治療酒精性肝病主要依靠戒酒。越來(lái)越多的證據(jù)表明免疫系統(tǒng)在酒精性肝病的病理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。在酒精刺激下，先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)被激活，表現(xiàn)為巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、B細(xì)胞和T細(xì)胞的浸潤(rùn)，并誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子導(dǎo)致肝臟炎癥。抑制炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)可以減輕肝臟炎癥，從而阻止酒精性肝病的發(fā)展。

髓源性抑制細(xì)胞（MDSC）由各種未成熟的髓系細(xì)胞組成，是免疫抑制網(wǎng)絡(luò)的主要組成部分。根據(jù)Ly6G和Ly6C的相對(duì)表達(dá)水平，其在嚙齒動(dòng)物中被人為地分為粒細(xì)胞抑制細(xì)胞（G－MDSC）和單細(xì)胞抑制細(xì)胞（M－MDSC）。G－MDSC（CD11b＋Ly6G＋）和M－MDSC（CD11b＋Ly6G－Ly6Chigh）表現(xiàn)出不同的形態(tài)，并通過(guò)各種途徑發(fā)揮免疫抑制能力。幾十年前，M－MDSC和G－MDSC都被認(rèn)為是通過(guò)抑制T細(xì)胞來(lái)幫助癌細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，但直到最近，它們?cè)诿庖呦到y(tǒng)中的重要性才被更多人重視。

MDSC會(huì)在大多數(shù)炎癥情況下擴(kuò)增和積累，在不同環(huán)境下產(chǎn)生各種促炎和抗炎細(xì)胞因子。M－MDSC和G－MDSC亞群在非癌癥相關(guān)疾病中的作用由特定的炎癥和時(shí)機(jī)決定。目前對(duì)CD11b＋Ly6G＋群的分類(lèi)仍有爭(zhēng)議，因?yàn)镚－MDSC和中性粒細(xì)胞在細(xì)胞表面都有CD11b和Ly6G的表達(dá)。由于在形態(tài)、表型和功能上的相似性，在研究它們?cè)谘装Y性疾病中的作用時(shí)產(chǎn)生混淆。一般來(lái)說(shuō)，具有抑制T細(xì)胞活性的CD11b＋Ly6G＋細(xì)胞被認(rèn)為是G－MDSC，但一些具有免疫抑制作用的中性粒細(xì)胞也可能包括在內(nèi)。G－MDSC可能是具有免疫抑制功能的中性粒細(xì)胞的新表型。因此，這種具有CD11b＋Ly6GhighLy6Cint表達(dá)的具有抑制T細(xì)胞作用的中性粒細(xì)胞，記為G－MDSC樣細(xì)胞。研究表明，G－MDSC樣細(xì)胞群在應(yīng)對(duì)急性酒精攝入時(shí)表現(xiàn)出保護(hù)作用，但其在慢性酒精性肝病中的作用機(jī)制并不清楚。

黃連素是一種從中藥材黃連中提取的生物堿，又叫做小檗堿，具有悠久的使用歷史。黃連素已被廣泛用作保肝藥物，其中大多數(shù)研究集中在CCl4等毒素引起的肝癌、脂肪肝和肝臟纖維化。在動(dòng)物研究中，已有研究證明黃連素對(duì)酗酒引起的肝損傷具有治療作用。但黃連素對(duì)急性－慢性飲酒引起的肝臟損傷的治療效果尚不清楚。急性－慢性酒精攝入的模型能較好地模擬酒精性肝病患者的飲酒模式。

2020年，香港大學(xué)李嘉誠(chéng)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)院的Sha Li等人，在《Clinical and Translational Medicine》雜志（IF2020＝11．492，醫(yī)學(xué)一區(qū)）發(fā)表了題為“Modulation of gut microbiota mediates berberine－induced expansion of immuno－suppressive cells to against alcoholic liver disease”的文章。本研究建立了一個(gè)酒精喂養(yǎng)動(dòng)物模型以模擬酒精性肝病患者飲酒模式。鑒于G－MDSC樣細(xì)胞群在對(duì)抗炎癥中的關(guān)鍵作用，推測(cè)黃連素可能介導(dǎo)與G－MDSC樣細(xì)胞群相關(guān)的酒精性肝病。本研究系統(tǒng)研究了G－MDSC樣細(xì)胞和相關(guān)的免疫細(xì)胞的參與及其分布。越來(lái)越多的證據(jù)表明，在飲酒后，腸道菌群組成發(fā)生了變化，進(jìn)一步影響了腸道通透性并導(dǎo)致?lián)p傷。通過(guò)藥物調(diào)節(jié)腸道微生物組成可能是治療酒精性肝病的希望。由于黃連素被認(rèn)為是腸道菌群的有效調(diào)節(jié)劑，因此本文也研究了腸道細(xì)菌變化對(duì)G－MDSC樣細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用。

02 所用到的主要方法

（1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

（2）體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

（3）流式細(xì)胞術(shù)

（4）實(shí)時(shí)定量PCR

（5）高通量測(cè)序

（6）Western blot

03 文章主要內(nèi)容摘要

黃連素是一種從許多中草藥中提取的異喹啉生物堿化合物，已被廣泛用于改善肝功能，但其對(duì)酒精性肝病（ALD）的保肝作用機(jī)制尚不清楚。為了從腸道微生物－免疫系統(tǒng)軸角度探究黃連素對(duì)治療酒精性肝病的潛在機(jī)制，本文建立了一個(gè)模擬酒精性肝病患者飲酒模式的酒精喂養(yǎng)動(dòng)物模型，通過(guò)生化試驗(yàn)和組織學(xué)檢查評(píng)估肝功能，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)免疫細(xì)胞，收集糞便樣本進(jìn)行16S rRNA基因擴(kuò)增測(cè)序。本文首次報(bào)道了黃連素對(duì)急性－慢性酒精性肝損傷有良好的改善作用，并探討了其與腸道微生物－免疫系統(tǒng)軸的相關(guān)機(jī)制。黃連素激活了小鼠肝臟中具有免疫抑制功能的細(xì)胞群體，即粒細(xì)胞樣髓源性抑制細(xì)胞（G－MDSC）樣群，從而減輕了酒精引起的肝臟損傷。黃連素可顯著增加血液和肝臟中G－MDSC樣細(xì)胞的數(shù)量，并相應(yīng)地減少了細(xì)胞毒性T細(xì)胞。抑制G－MDSC樣細(xì)胞的數(shù)量可顯著減弱黃連素對(duì)抗酒精的保護(hù)作用。在體外培養(yǎng)的G－MDSCs樣細(xì)胞群中，黃連素激活了IL6／STAT3信號(hào)，而抑制STAT3的活性則減弱了黃連素對(duì)該細(xì)胞群的激活作用。此外，黃連素改變了整個(gè)腸道微生物群落，主要是增加了嗜黏蛋白阿克曼氏菌的豐度。腸道微生物群的減少消除了黃連素對(duì)G－MDSC樣群的誘導(dǎo)作用，并削弱了其對(duì)小鼠抗酒精的保肝作用，這表明腸道菌群可能參與介導(dǎo)這種保護(hù)群體的擴(kuò)增。本文深入研究了免疫抑制反應(yīng)在酒精性肝病中的作用，并有助于理解黃連素的藥理作用和作用機(jī)制。

       原文標(biāo)題 : 黃連素的酒精性肝病治療作用與誘導(dǎo)免疫抑制細(xì)胞及調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)有關(guān)