前言

腫瘤免疫治療是通過人體免疫系統(tǒng)恢復(fù)或增強(qiáng)對(duì)腫瘤的自然防御的一種治療方法。這種治療通常針對(duì)癌細(xì)胞表面的特定生物分子，如腫瘤相關(guān)抗原（TAAs）。抗腫瘤活性是通過將宿主免疫系統(tǒng)導(dǎo)向TAAs來實(shí)現(xiàn)的，從而建立或誘導(dǎo)針對(duì)癌細(xì)胞的適應(yīng)性免疫反應(yīng)。在過去的幾十年里，利用單克隆抗體（Mab）治療癌癥取得了巨大的成功，其中許多已經(jīng)被批準(zhǔn)用于癌癥治療或臨床試驗(yàn)。

4－1BB于1989年被鑒定為一種誘導(dǎo)基因，在抗原啟動(dòng)的T細(xì)胞上表達(dá)，而在靜止的T細(xì)胞上不表達(dá)。此外，已知其在樹突狀細(xì)胞（DC）、自然殺傷細(xì)胞（NKs）、活化的CD4＋和CD8＋T淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、自然殺傷T細(xì)胞（NKT）和肥大細(xì)胞中表達(dá)，但骨髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）在其表面不表達(dá)該分子。抗4－1BB抗體具有激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞和增加γ干擾素（IFN－γ）生成的能力，靶向4－1BB的雙抗和多抗在抗癌方面顯示出巨大的潛力。

4－1BB的分子特性

腫瘤壞死因子受體超家族（TNFRSF）是一個(gè)由29個(gè)成員組成的蛋白質(zhì)超家族，在人類免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。這個(gè)分子家族分為兩類：死亡受體（8個(gè)成員）和激活受體。它們都含有一個(gè)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路激活域和一個(gè)細(xì)胞外受體位點(diǎn)。這些受體位點(diǎn)可通過與腫瘤壞死因子超家族（TNFSF）的相應(yīng)配體結(jié)合來激活。已有研究表明，TNFSF－TNFRSF的配體受體（如CD40－CD40L、CD27－CD70或OX40－OX40L）信號(hào)通路可以調(diào)節(jié)體內(nèi)許多重要的過程，如細(xì)胞的發(fā)育和死亡，細(xì)胞因子和趨化因子的誘導(dǎo)。越來越多的證據(jù)表明，TNFRSF和TNFSF成員參與了包括癌癥在內(nèi)的多種疾病的炎癥和病理學(xué)。因此，針對(duì)TNFSF和TNFRSF配體－受體相互作用的免疫治療技術(shù)在癌癥治療中具有很高的潛力。

在免疫治療中，有效的免疫反應(yīng)需要兩種生物信號(hào)來充分激活T細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞。第一種信號(hào)即抗原特異性信號(hào)，是由淋巴細(xì)胞受體與抗原呈遞細(xì)胞（APCs）上主要組織相容性復(fù)合體（MHC）分子結(jié)合的特異性肽相互作用而產(chǎn)生的。第二種是非抗原特異性的共刺激信號(hào)。這種類型的信號(hào)是通過T細(xì)胞和APCs上表達(dá)的共刺激分子之間的相互作用提供的。4－1BB是一種共刺激分子，屬于TNFRSF。它是在80年代末進(jìn)行T細(xì)胞因子篩選時(shí)，對(duì)小鼠輔助T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞用刀豆球蛋白A刺激發(fā)現(xiàn)的。人4－1BBL于1994年首次通過直接表達(dá)克隆從活化的CD4＋T淋巴細(xì)胞群中分離出來。4－1BBL主要在樹突狀細(xì)胞、B細(xì)胞或巨噬細(xì)胞上表達(dá)。

在小鼠中，4－1BB／4－1BBL激活導(dǎo)致TNFR因子（TRAF1和TRAF2）的募集，從而導(dǎo)致活化B細(xì)胞的NF－κB、JNK／SAPK和p38 MAPK通路的激活。這會(huì)產(chǎn)生共刺激信號(hào)來誘導(dǎo)CD4＋和CD8＋T淋巴細(xì)胞的活性，其中對(duì)CD8＋T細(xì)胞的增殖更有利。通過p38 MAPK激活CD4＋T淋巴細(xì)胞對(duì)于輔助性T細(xì)胞（Th）1和2的發(fā)育以及Th1效應(yīng)細(xì)胞的調(diào)節(jié)也是必不可少的。試驗(yàn)證明，4－1BB的激動(dòng)劑單克隆抗體可向CD8＋T淋巴細(xì)胞提供長期存活信號(hào)，從而抑制活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡（AICD）。4－1BB／4－1BBL通路也影響免疫系統(tǒng)中的非T細(xì)胞，包括通過放大單核細(xì)胞介導(dǎo)的恒定自然殺傷T細(xì)胞（iNKT）的增殖來控制單核細(xì)胞數(shù)量。4－1BB和／或4－1BBL激動(dòng)劑可刺激脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生多種炎癥細(xì)胞因子，如IL－6、TNF－α和MCP－1。B細(xì)胞上4－1BB交聯(lián)產(chǎn)生共刺激信號(hào)，激活并誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖。

4－1BB靶向藥物的開發(fā)

BMS的4－1BB抗體藥物 Urelumab（BMS－663513）是第一個(gè)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的靶向4－1BB治療藥物，其是一種IgG4 單克隆抗體。Urelumab最初的臨床結(jié)果發(fā)表于2008年，有著令人鼓舞的療效。但Phase1和Phase2階段的數(shù)據(jù)顯示出肝臟毒性，并且似乎與藥物靶標(biāo)和劑量有關(guān)，因此臨床開發(fā)受到了阻礙。Urelumab于2012年重新進(jìn)入臨床試驗(yàn)，目前正在進(jìn)行研究Urelumab聯(lián)合其他藥物共同治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、胰腺癌等實(shí)體瘤的潛力。

Utomilumab（PF－05082566）是輝瑞開發(fā)的4－1BB人源化IgG2單克隆抗體，相對(duì)于Urelumab，其具有更高的安全性，目前也正在進(jìn)行多項(xiàng)臨床試驗(yàn)中。除了以上兩個(gè)，還有一些公司布局該領(lǐng)域，包括雙特異性抗體，比如BioNTech，Aptevo等。

觀之國內(nèi)，也有部分4－1BB抗體領(lǐng)先企業(yè)，并且關(guān)于4－1BB藥物的研究也越來越多。2018年，天演藥業(yè)的針對(duì)4－1BB靶點(diǎn)的激動(dòng)型全人源單克隆抗體 ADG106已在中美同時(shí)獲得臨床試驗(yàn)批件，開展 I 期臨床。2019年10月23日，無錫智康弘義申報(bào)臨床的4－11BB抗體WBP3425獲得NMPA受理，成為國內(nèi)第二家申報(bào)該靶點(diǎn)抗體的公司。2020年4月16日，上海懷越生物4－1BB抗體藥物PE0116的臨床試驗(yàn)申請(qǐng)獲得NMPA受理，受理號(hào)為CXSL2000070，成為國內(nèi)第三款申報(bào)臨床的國產(chǎn)4－1BB抗體。

另外，國內(nèi)也有部分公司在布局PD－L1／4－1BB雙抗，如科望生物從Inhibrx公司引進(jìn)的ES101、天境生物的TJ－L14B、以及德琪醫(yī)藥的ATG－101等。

4－1BB激動(dòng)劑抗體的單藥治療

4－1BB抗體在動(dòng)物體內(nèi)預(yù)防癌癥的效果促進(jìn)了臨床的開發(fā)。在一項(xiàng)臨床前研究中，一種與4－1BB胞外域結(jié)合的人IgG2，即PF－05082566，可以有效地防止異種移植人類癌癥模型的進(jìn)展。這種抗4－1BB抗體激活NF－κB，誘導(dǎo)人和猴白細(xì)胞產(chǎn)生下游細(xì)胞因子，并促進(jìn)猴CD8＋T細(xì)胞增殖�？�4－1BB單抗已被考慮用于晚期癌癥患者的臨床試驗(yàn)，但由于4－1BB受體上抗4－1BB抗體結(jié)合位點(diǎn)的物種間差異，其抗癌能力應(yīng)該是多變的。具體地說，它的結(jié)合作用僅限于富含半胱氨酸結(jié)構(gòu)域（CRD），并且在小鼠和人之間存在差異。小鼠4－1BBL主要與CRDII結(jié)合，人4－1BBL主要與CRDIII結(jié)合。簡言之，人和小鼠的4－1BB CRD有四個(gè)CRD（CRDI，II，III和IV）。CRDI和CRDIV區(qū)都只含有4種半胱氨酸，不能形成典型的CRD結(jié)構(gòu)，而CRDII和CRDII都含有6種半胱氨酸，可以形成典型的CRD結(jié)構(gòu)。

目前，針對(duì)兩種抗4－1BB單克隆抗體，即urelumab（BMS－663513）和utomilumab（PF－05082566）正在進(jìn)行兩項(xiàng)臨床試驗(yàn)。它們是分別由百時(shí)美施貴寶和輝瑞公司開發(fā)。在一項(xiàng)臨床前研究中，Urelumab顯示了一種很有前途的癌癥治療潛力。然而，抗體的肝臟毒性在隨后不久出現(xiàn)，這導(dǎo)致了2008年12月至2012年2月期間，urelumab開發(fā)計(jì)劃被擱置。這種毒性主要是由于腫瘤和基質(zhì)細(xì)胞分泌的S100A4蛋白所致。最近的研究表明，每3周每名患者注射8毫克或0．1毫克／千克的抗體是安全的。

與urelumab相比，utomilumab在27名癌癥患者隊(duì)列中沒有觀察到劑量限制性毒性（DLT）或肝酶升高。最近，utomilumab治療55例晚期癌癥患者的I期試驗(yàn)結(jié)果出來了。試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持了utomilumab耐受性良好的安全性，每4周在10mg／kg的劑量水平下未觀察到DLT。除此之外，大多數(shù)患者出現(xiàn)1級(jí)或2級(jí)以下的不良事件。實(shí)體瘤患者總客觀響應(yīng)率為3．8％，最佳總有效率為24．5％，其中完全緩解1例。在臨床環(huán)境下，urelumab或utomilumab的毒性差異的機(jī)制已經(jīng)比較清楚，這可能是由于它們的激動(dòng)劑活性或4－1BB結(jié)合特性的機(jī)制差異所致。utomilumab和urelumab結(jié)合受體結(jié)構(gòu)的比較表明，單抗在表位和相對(duì)取向上具有明顯不同的結(jié)合位點(diǎn)。utomilumab沿著4－1BB側(cè)結(jié)合，在CRD III和IV的交界處接觸。相比之下，urelumab結(jié)合在CRD I上4－1BB受體的N端。使用劑量減少的Ureumab單藥治療的臨床療效結(jié)果基本無效，并且在耐受劑量下，Urelumab的臨床活性有限。雖然有報(bào)道稱，utomilumab具有更好的安全性，但相對(duì)于urelumab，它是一種藥效較弱的4－1BB激動(dòng)劑。由于其較好的安全性，與urelumab相比，utomilumab是聯(lián)合治療的首選單抗。

在血液腫瘤中，抗4－1BB抗體的單一免疫治療在某些模型中可以調(diào)節(jié)血液惡性腫瘤。在多發(fā)性骨髓瘤小鼠模型中，與對(duì)照組相比，該抗體可挽救治療組40－50％的小鼠�？�4－1BB單抗還抑制了50％實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的急性髓系白血�。ˋML）的生長�？�4－1BB單克隆抗體的這些抗血液腫瘤的結(jié)果是由于CD8＋ T細(xì)胞和IFN－γ的增加。

靶向4－1BB的雙抗

在針對(duì)TNFRSF共刺激受體的臨床試驗(yàn)中，4－1BB似乎是最有希望的靶點(diǎn)。為了在維持藥效的同時(shí)降低全身性4－1BB激動(dòng)劑對(duì)肝臟的毒性，用同時(shí)與腫瘤相關(guān)抗原（TAA）結(jié)合的雙特異性分子靶向4－1BB，將4－1BB＋T細(xì)胞激動(dòng)劑限制在腫瘤微環(huán)境中似乎是一種理想的方法。

首先，只有暴露抗原的T細(xì)胞（4－1BB＋T細(xì)胞）參與靶向TAA，因此，靶向非腫瘤毒性的細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）可以最小化。

第二，4－1BB靶向雙特異性抗體可能比CD3靶向雙特異性抗體對(duì)抗原丟失更耐受，因?yàn)?－1BB刺激可獨(dú)立于MHC或抗原擴(kuò)增腫瘤反應(yīng)性記憶T細(xì)胞。記憶性T細(xì)胞池?cái)U(kuò)大了，就可以識(shí)別多種腫瘤抗原。

最后，相比CD3＋T細(xì)胞導(dǎo)向，4－1BB的激活可以減輕T細(xì)胞衰竭。數(shù)據(jù)表明，4－1BB共刺激可恢復(fù)小鼠耗盡的CD8＋TIL的功能，延長細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）的持續(xù)時(shí)間，增強(qiáng)CTL功能。

GEN1046

是一種靶向PD－L1和CD137的雙特異性抗體。PD－L1作為TAA，同時(shí)GEN1046也抑制PD－L1通路的信號(hào)。在1期臨床實(shí)驗(yàn)中，雖然未達(dá)到MTD，但報(bào)告了3級(jí)肝毒性。在接受有效劑量治療的56名患者中有4例PRs，DCR 65．6％。在隊(duì)列擴(kuò)展試驗(yàn)中，觀察到了先前使用檢查點(diǎn)抑制劑治療的NSCLC患者的初步抗腫瘤療效。這兩項(xiàng)研究支持CD137靶向雙特異性分子在實(shí)體瘤中的應(yīng)用。

ES101

ES101最初由Inhibrx公司開發(fā)，科望醫(yī)藥引進(jìn)其大中華區(qū)權(quán)益。ES101是一個(gè)靶向PD－L1／4－1BB的四價(jià)雙特異性抗體，包含4個(gè)結(jié)合域，其中兩個(gè)靶向PD－L1，另外兩個(gè)靶向4－1BB。

ES101與腫瘤細(xì)胞表面的PD－L1結(jié)合，可以解除PD－1／PD－L1介導(dǎo)的免疫檢查點(diǎn)抑制效應(yīng)；另一方面ES101也可以結(jié)合T細(xì)胞表面的4－1BB，但是只有當(dāng)ES101結(jié)合了PD－L1之后，4－1BB結(jié)合域才有可能驅(qū)動(dòng)4－1BB分子在T細(xì)胞表面的聚集，這就使得4－1BB介導(dǎo)的免疫激活效應(yīng)集中于腫瘤附近的T細(xì)胞，有效降低了潛在的脫靶毒性。ES101目前處于2期臨床試驗(yàn)階段。

TJ－CD4B

TJ－CD4B（又稱ABL111），是由天境生物與韓國ABL Bio雙方合作開發(fā)的靶CLDN18．2和4－1BB的雙特異性抗體，已經(jīng)獲FDA批準(zhǔn)開展臨床研究。

TJ－CD4B具有獨(dú)特4－1BB結(jié)合表位，使其僅在與Claudin 18．2結(jié)合時(shí)才會(huì)激活T細(xì)胞。TJ－CD4B的這一特性既增強(qiáng)了抗腫瘤免疫力，也降低了因4－1BB廣泛表達(dá)而過度激活T細(xì)胞引起的肝毒性風(fēng)險(xiǎn)和降低全身免疫反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。

TJ－L14B

TJ－L14B是天境生物另一款創(chuàng)新雙抗產(chǎn)品，同時(shí)靶向PD－L1和4－1BB，通過阻斷PD－L1信號(hào)并刺激4－1BB信號(hào)，激活T細(xì)胞產(chǎn)生抗腫瘤協(xié)同作用。臨床前研究表明，在給藥劑量相同的前提下，TJ－L14B的抗腫瘤活性既優(yōu)于PD－L1抗體或4－1BB抗體的單藥或聯(lián)合治療又非常持久。天境生物已于2021年4月在美國啟動(dòng)了TJ－L14B用于治療局部晚期或轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤的1期臨床試驗(yàn)（NCT04762641）。

PM1003

PM1003是一款靶向PD－L1和4－1BB的雙特異性抗體，根據(jù)藥審中心CDE官網(wǎng)公示，普米斯生物的PM1003注射液的臨床試驗(yàn)申請(qǐng)獲批，擬用于治療晚期惡性實(shí)體瘤。

ATG－101

ATG－101是一種新型PD－L1／4－1BB雙特異性抗體，擬用于治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤及實(shí)體瘤。目前，ATG－101正在轉(zhuǎn)移性／晚期實(shí)體瘤和成熟B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者中，開展首次人體1期試驗(yàn)。

PRS－343

PRS－343是一種靶向HER2和4－1BB的雙特異性分子，目前正在進(jìn)行HER2陽性實(shí)體瘤的I期臨床研究。在接受有效劑量治療的患者中（n＝33），12％的患者達(dá)到ORR，包括1個(gè)CR，疾病控制率（DCR）為52％，沒有DLT報(bào)告。

引人注目的是，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中也沒有CRS或毒性的報(bào)道，這突出了4－1BB靶向與CD3靶向雙特異性化合物的進(jìn)一步優(yōu)勢(shì)。PRS－343在臨床上與atezolizumab聯(lián)合應(yīng)用也有報(bào)道，但聯(lián)合應(yīng)用似乎缺乏疊加效應(yīng)。

除了雙抗藥物外，針對(duì)4－1BB靶點(diǎn)的研發(fā)已延伸至三抗與四抗。NM21－1480是一種針對(duì)PD－L1、4－1BB和人血清蛋白的單價(jià)三特異性抗體片斷分子，原研為瑞士生物技術(shù)公司Numab，國內(nèi)權(quán)益歸屬基石藥業(yè)。NM21－1480可發(fā)揮PD－L1阻斷以及4－1BB激動(dòng)的協(xié)同效應(yīng)，此外，通過結(jié)合HSA 可延長其半衰期，從而降低給藥頻率。。根據(jù)Numab于2018年在AACR上公布的臨床前數(shù)據(jù)，ND021在有效性及安全性方面優(yōu)于PD－1／PDL1阻斷劑及其與針對(duì)共刺激受體的抗體的結(jié)合。2021年7月，NM21－1480中國臨床試驗(yàn)申請(qǐng)獲受理。

百利藥業(yè)深度布局四抗藥物。GNC－035是一款靶向PD－L1×CD3×4－1BB×ROR1的四抗藥物， GNC－039靶向PD－L1×4－1BB×CD3×EGFR，兩款藥物均處于Ⅰ期臨床研究。在設(shè)計(jì)上，GNC－035和GNC－039均在 IgG 基礎(chǔ)上串聯(lián) 3 個(gè) scFv 搭建對(duì)稱的四特異性抗體。其中 PD－L1、4－1BB、CD3 為免疫調(diào)節(jié)功能，第 4 靶點(diǎn)為腫瘤抗原。

4－1BB靶向治療實(shí)體瘤的挑戰(zhàn)

首先，有必要建立一個(gè)可轉(zhuǎn)化的臨床前模型，可以預(yù)測(cè)臨床安全性和反應(yīng)。除了癌癥類型的免疫反應(yīng)外，了解器官特異性免疫反應(yīng)也很重要。此外，還有優(yōu)化免疫細(xì)胞激活的方面，包括優(yōu)化藥物的分子大小，以穿透腫瘤并激活腫瘤環(huán)境中的T細(xì)胞，這是至關(guān)重要的。

然而，如果分子的大小足夠小，那么其在循環(huán)系統(tǒng)中的持續(xù)時(shí)間可能不足以有效到達(dá)腫瘤。為了通過降低較小的雙特異性分子的腎清除率來實(shí)現(xiàn)更好的藥物遞送，可以使用與白蛋白結(jié)合的形式。CB307和NM21－1480都使用HSA偶聯(lián)的結(jié)構(gòu)，目前正在I期臨床試驗(yàn)中進(jìn)行研究。另外，由于T細(xì)胞持續(xù)暴露于抗原可能導(dǎo)致T細(xì)胞衰竭，因此確定哪種治療半衰期最合適尚不清楚。為了回答這個(gè)問題，可能需要對(duì)多種給藥方案進(jìn)行臨床研究。

臨床試驗(yàn)中4－1BB靶向分子患者選擇的優(yōu)化也需要探索。4－1BB＋TIL在多種實(shí)體瘤中的表達(dá)已在mRNA水平檢測(cè)到，然而迄今為止，還沒有基于4－1BB＋TIL信息對(duì)4－1BB靶向藥物進(jìn)行的前瞻性臨床試驗(yàn)。這是因?yàn)?－1BB表達(dá)的動(dòng)態(tài)性使得很難獲得確定的結(jié)果，事實(shí)上，沒有數(shù)據(jù)表明對(duì)4－1BB單抗的反應(yīng)與腫瘤微環(huán)境中4－1BB的表達(dá)水平相關(guān)。

對(duì)于PRS－343，在觀察到CD8＋T細(xì)胞擴(kuò)增的劑量水平上可以看到臨床反應(yīng)，然而，CD8＋T細(xì)胞擴(kuò)增可能被證明是臨床療效的必要條件，但不是充分條件，因?yàn)榧词褂^察到CD8＋T細(xì)胞擴(kuò)增，其他患者也沒有看到臨床反應(yīng)。了解補(bǔ)償途徑，以最大限度地發(fā)揮T細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，同時(shí)保持適當(dāng)?shù)陌踩�邊際將需要進(jìn)一步的研究，以為成功的聯(lián)合治療鋪平道路。

最后，4－1BB激活產(chǎn)生記憶T細(xì)胞的有效方法，可能是持久的抗癌免疫效果的關(guān)鍵，因?yàn)橛洃汿細(xì)胞不會(huì)耗竭。

小結(jié)

4－1BB作為一種免疫腫瘤靶點(diǎn)非常具有吸引力，并且根據(jù)現(xiàn)有的臨床資料，它仍然是TNFRSF中T細(xì)胞共刺激受體中最有希望的靶點(diǎn)之一。目前對(duì)下一代4－1BB靶向分子的第一階段研究致力于在不影響藥效的前提下解決肝毒性問題。

了解4－1BB治療患者的生物學(xué)特性以及選擇患者以優(yōu)化臨床反應(yīng)的策略對(duì)于4－1BB靶向藥物的未來成功至關(guān)重要。4－1BB的雙抗策略將為腫瘤免疫治療開辟一條新的道路。

       原文標(biāo)題 : 靶點(diǎn)說 | 4-1BB