CRISPR檢測技術(shù)法

基于CRISPR的檢測技術(shù)是一種新的新冠病毒RNA檢測，僅需純化的核酸分子樣本，通過簡單三步即可在1個小時的時間里完成檢測。張峰團隊在SARS-Cov-2疫情進展后不久曾公開發(fā)表過一項基于該技術(shù)的核酸檢測方法。他們的主要工具是Cas13a切割酶和針對靶序列設(shè)計的兩條gRNA，一條針對S基因，一條針對Orf1ab基因。理論上，只要樣本里有SARS-Cov-2病毒相應(yīng)RNA，gRNA就會引導Cas13a去切割靶RNA，所以陽性組會出現(xiàn)兩條片段，而陰性組則僅有一條對照條帶。不過，張峰團隊的這項成果還處于臨床研究中。

普世利華

普世利華發(fā)布消息稱，其與普世君安聯(lián)合開發(fā)的2019新型冠狀病毒即時現(xiàn)場檢測試劑盒（CRISPR剪切法）已完成驗證。這是一款新型冠狀病毒即時現(xiàn)場檢測試劑盒，無需借助定量PCR儀，操作簡便、快速，可更廣泛地應(yīng)用于多種防控一線場景，如基層醫(yī)院、交通樞紐、機場、海關(guān)等。

據(jù)介紹，普世利華的試劑盒能夠在30多分鐘內(nèi)完成檢測，檢測限可達到aM級別（10-18），gRNA特異性識別保證了靶標檢測的高度特異性。此外，該試劑盒為凍干形態(tài)產(chǎn)品，便于常溫運輸，如配套取樣器使用，可實現(xiàn)免提取分子檢測。

微遠基因

1月23日，微遠基因宣布僅用5天時間即研制成功“新型冠狀病毒（2019-nCoV）核酸檢測試劑盒（恒溫CRISPR法）”。該基因編輯工具創(chuàng)新產(chǎn)品CRISPR-nCoV，實現(xiàn)了高特異性、單拷貝級別靈敏度、40分鐘快速的新型冠狀病毒核酸檢測。

微遠基因稱，該試劑盒利用自有CRISPR病原診斷平臺，基于GISAID公布的2019-nCoV序列(BetaCoV/Wuhan/IPBCAMS-WH-01/2019, Collection date: 2019-12-24)，設(shè)計特定CRISPR檢測位點開發(fā)完成，并進行了產(chǎn)品性能驗證，與中國醫(yī)學科學院病原生物學研究所進行了聯(lián)合評估。CRISPR-nCoV試劑盒靈敏度可低至單個拷貝，具備與其它冠狀病毒明確區(qū)分的高特異性，可檢測痰液、拭子、肺泡灌洗液等多種樣本類型，用樣量可以低至100ul。檢測時間縮短至1小時以內(nèi)，并且檢測儀器便攜可拓展，具有實現(xiàn)床旁即時檢測的應(yīng)用潛力。

博杰生物

2月21日，武漢博杰生物醫(yī)學科技有限公司宣布，其與解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學中心（中國人民解放軍第三〇二醫(yī)院）核心團隊攜手研發(fā)的新冠狀病毒CRISPR快速核酸檢測試劑盒研發(fā)成功，并已進入臨床做初步驗證。據(jù)臨床操作人員反饋，具有操作簡便、速度快、靈敏度和特異度高等優(yōu)點。快速檢測出病毒，排查出感染患者。博杰生物稱，該試劑盒采用CRISPR技術(shù)，不僅檢測快速、便捷、準確，還采用特殊技術(shù)，有效降低了病毒RNA的生物風險。此外，CRISPR快速核酸檢測試劑盒配備的儀器簡單、便攜，無需高端昂貴的檢測儀器和專業(yè)培訓檢測人員，只需一個手提箱，便于在基層醫(yī)療單位開展檢測工作。

同時，博杰生物正式啟動新型冠狀病毒（2019-nCoV）核酸快速檢測試紙的研發(fā)。 該測試紙以CRISPR為核心技術(shù)，相較于傳統(tǒng)的免疫膠體金技術(shù)，不需要制備特異性抗體，流程更加簡便穩(wěn)定，針對病毒核酸特異性片段，可以更早期地檢測病毒（免疫法一般在感染病毒第3-5天測出，而核酸檢測試紙在感染病毒的任何階段都能測出）。而相較于現(xiàn)有市場上病毒檢測RT-PCR試劑盒需要精密檢測儀器和高水平檢測人員、周期較長等特點，快速直觀的CRISPR試紙在篩查潛伏期人群的應(yīng)用中，適用于三甲醫(yī)院、各縣市地區(qū)醫(yī)院以及條件相對簡陋的社區(qū)醫(yī)院，甚至居家都可以實現(xiàn)自我初步檢測。

恒溫擴增法

恒溫擴增法避免了熒光PCR法中對樣本實施的溫度調(diào)整，主要涉及2類技術(shù)，一類是利用特殊酶取代了PCR中高溫解鏈的步驟，比如LAMP技術(shù)中的鏈置換DNA聚合酶和RPA中的重組酶、單鏈結(jié)合蛋白和鏈置換酶；另一類技術(shù)則涉及DNA和RNA之間相互轉(zhuǎn)換來擴增，比如NASBA和TMA用到的逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA聚合酶。

博奧生物

2月22日，由清華大學醫(yī)學院程京院士團隊、四川大學華西醫(yī)院、博奧生物集團有限公司共同設(shè)計開發(fā)的包括新型冠狀病毒在內(nèi)的“六項呼吸道病毒核酸檢測試劑盒（恒溫擴增芯片法）”獲國家藥監(jiān)局應(yīng)急醫(yī)療器械審批批準，這是首個獲得國家局注冊證書的該類產(chǎn)品。

據(jù)介紹，該試劑盒是用于呼吸道多病毒檢測的全新微流控芯片系統(tǒng)，只需采集患者的口咽試子等分泌物樣本，在1.5小時內(nèi)便可一次性檢測包括新型冠狀病毒（2019-nCoV）在內(nèi)的6種呼吸道常見病毒，目前已獲15項授權(quán)專利。除新型冠狀病毒外，該系統(tǒng)還可以比其他已獲批單一指標檢測產(chǎn)品快一倍的速度同時檢測其他5種呼吸道常見病毒，故能準確鑒別包括新型冠狀病毒在內(nèi)的各種常見病毒，達到排查其他引起相似癥狀病毒的目的；產(chǎn)品具有更快、更多、更安全的特點。

博奧生物表示，該試劑盒一經(jīng)應(yīng)用到臨床，將可以對疑似患者快速鑒別診斷、及時針對性治療，大大減輕醫(yī)院負擔，使寶貴的救治資源集中用于新型冠狀病毒患者的救治中。產(chǎn)品獲批后，清華大學已聯(lián)系疫情嚴重的武漢市，緊急提供4套檢測儀器，并捐贈價值500萬人民幣可完成1.2萬人份檢測的芯片和試劑。這些儀器設(shè)備將用于華中科技大學附屬協(xié)和醫(yī)院、同濟醫(yī)院和火神山等醫(yī)院復檢臨床診斷確定的新冠病人和鑒別診斷疑似病人。

中幟生物

基于國內(nèi)外專家在GISAID平臺上發(fā)布的六個新型冠狀病毒基因組序列信息，中幟生物研發(fā)團隊完成“新型冠狀病毒（2019-nCoV）核酸檢測試劑盒（雙擴增法）”和“新型冠狀病毒（2019-nCoV）核酸檢測試劑盒（RNA恒溫擴增-金探針層析法）”雙試劑盒的研制，以輔助呼吸道感染性疾病新型冠狀病毒的早期鑒別診斷。

其中，基于專利技術(shù)“RNA恒溫擴增-金探針層析技術(shù)（RGT）”開發(fā)的新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒可在1h完成病毒檢測，無需核酸提取，采集上呼吸道或下呼吸道樣本后直接細胞裂解進行病毒RNA恒溫擴增，對設(shè)備要求低，無需特殊儀器，恒溫裝置即可完成擴增和層析檢測，適用于更層級醫(yī)療機構(gòu)，適用于各種應(yīng)用場景，實現(xiàn)病原體RNA POCT檢測。

作者：王世薇